抗体-药物偶联物（ADC）表征是一项用于评估ADC的结构、稳定性、纯度和功能的分析技术。ADC是一类由单克隆抗体、连接子（linker）和小分子细胞毒性药物组成的靶向治疗药物，通过抗体的高特异性结合能力，将细胞毒性药物精准递送至癌细胞，极大提高了抗肿瘤治疗的有效性，同时降低了非靶向细胞的毒副作用。由于ADC结构复杂，成分多样，其研发和生产过程中需要精确的表征分析，以确保其质量、稳定性和治疗效果。抗体-药物偶联物（ADC）表征的核心内容包括偶联比（DAR，Drug-to-Antibody Ratio）、连接位点分析、结构完整性、纯度分析和生物学活性评估。偶联比是衡量ADC中平均每个抗体分子上所结合的药物数量的关键参数，通常通过高效液相色谱（HPLC）、质谱（MS）或毛细管电泳（CE）等方法测定。DAR的大小直接影响ADC的疗效和安全性，如果DAR过低，则药物载量不足，影响抗癌效果；如果DAR过高，则可能影响抗体的稳定性和药物的体内分布，从而导致副作用增加。因此，精确测定ADC的DAR是其质量控制的核心环节之一。连接位点分析是另一个ADC表征内容。ADC的药物分子通常通过化学连接子（linker）与抗体的赖氨酸（Lys）或半胱氨酸（Cys）残基共价结合。不同的连接位点可能会影响ADC的稳定性、均一性和生物活性。通过液相色谱-质谱联用技术（LC-MS），可以解析ADC的结合位点分布，从而优化ADC的偶联策略，确保其在体内具备良好的稳定性和靶向性。
结构完整性分析对于确保ADC的质量至关重要。抗体结构的变化，如聚集体形成、降解或部分还原，可能会影响ADC的稳定性和功能。因此，需要采用多种生物物理和生化方法进行结构表征，包括圆二色光谱（CD）测定抗体的二级结构，差示扫描量热法（DSC）检测抗体的热稳定性，以及动态光散射（DLS）评估ADC的聚集状态。此外，完整的ADC分子还需要评估其糖基化修饰情况，糖基化不仅影响ADC的体内半衰期，还可能影响其免疫原性，因此，采用液相色谱-质谱（LC-MS）或毛细管电泳（CE）进行糖基化分析是抗体-药物偶联物（ADC）表征过程中的步骤。
纯度分析是抗体-药物偶联物（ADC）表征中不可或缺的环节。由于ADC是通过化学修饰形成的复杂生物制剂，其生产过程中可能会形成不同形式的杂质，如未偶联抗体、游离药物、聚集体和片段化产物等。这些杂质可能影响ADC的生物学活性，甚至导致不良反应。为了评估ADC的纯度，通常采用高效液相色谱（HPLC）、凝胶渗透色谱（SEC）、毛细管电泳（CE）等方法。特别是SEC-HPLC可以有效区分ADC的单体、聚集体和降解产物，为质量控制提供数据。
除了理化分析外，ADC的生物学活性评估同样至关重要。ADC的抗体部分需要保持对靶细胞抗原的高亲和力，同时，药物部分需要在细胞内有效释放，从而杀死癌细胞。因此，ADC的体外活性评估通常包括抗原结合实验（如ELISA、表面等离子共振SPR）、细胞毒性实验（MTT、CCK-8）、胞内药物释放实验（荧光检测、流式细胞术）等。此外，体内药代动力学（PK）和生物分布实验有助于研究ADC在动物体内的代谢途径和靶向分布情况，为临床应用提供关键参考数据。
抗体-药物偶联物（ADC）表征的另一个方面是其稳定性分析。由于ADC的复杂结构，在储存和体内循环过程中可能发生降解、脱落或聚集，影响其疗效和安全性。因此，需要进行长期和加速稳定性研究，以评估ADC在不同温度、pH值、光照和储存条件下的稳定性。这些研究通常采用SEC-HPLC、LC-MS和DLS等方法监测ADC的降解情况，并结合生物学活性实验验证其功能变化。
