凝胶过滤色谱法测定分子量的原理是利用不同分子在凝胶填充材料中的不同扩散速率。较大的分子因无法进入凝胶颗粒的孔隙，因此较早从色谱柱中流出；而较小的分子则能进入凝胶颗粒的孔隙，滞留的时间较长，最终较晚流出。通过测定样品的洗脱时间（或体积），可以推算出样品的分子量。这一过程需要选择合适的凝胶填充材料，并对流动相条件进行严格控制，以保证分离效果的准确性。
一、优缺点
在使用凝胶过滤色谱法测定分子量时，常常需要使用标准样品进行标定。标准分子通常为已知分子量的物质，它们的洗脱体积或时间可用来构建校准曲线。通过与标准曲线的对比，可以推算未知样品的分子量。这一方法不仅操作简便，而且可以同时分析多种分子，具有高通量的优点。
凝胶过滤色谱法测定分子量的优势在于其无损性。与其他分子量测定方法（如离子交换色谱或电泳法）相比，凝胶过滤色谱法不会破坏样品结构，适用于分析蛋白质和其他生物大分子。此外，该方法的分辨率较高，尤其适用于分子量范围在几千到几百万道尔顿的物质。然而，凝胶过滤色谱法在分子量测定方面也有其局限性，例如对大分子的分离能力受限，且对样品的纯度和浓度要求较高。
二、技术应用
为进一步提高凝胶过滤色谱法测定分子量的准确性，研究人员常常结合其他分析技术进行联合应用。例如，结合质谱分析（MS）或紫外-可见光谱（UV-Vis）检测，可以更精确地获得样品的分子量分布和结构信息。近年来，随着高效液相色谱技术的发展，凝胶过滤色谱法的分离效果得到了进一步优化，其应用范围也得到了显著扩展。
凝胶过滤色谱法测定分子量不仅在基础科研中发挥重要作用，在工业生产中也有广泛的应用，特别是在生物制药和蛋白质工程领域。通过这一方法，可以精确地监控产品的分子量分布，确保产品质量的一致性。
