声明
本文是学习GB-T 42430-2023 血液、尿液中乙醇、甲醇、正丙醇、丙酮、异丙醇和正丁醇检验. 而整理的学习笔记,分享出来希望更多人受益,如果存在侵权请及时联系我们
1 范围
本文件描述了采用顶空气相色谱(HS/GC) 和顶空气相色谱-质谱(HS/GC-MS)
检验血液、尿液中
乙醇、甲醇、正丙醇、丙酮、异丙醇和正丁醇的方法。
本文件适用于血液、尿液中乙醇、甲醇、正丙醇、丙酮、异丙醇和正丁醇的顶空气相色谱-质谱定性分
析和顶空气相色谱定性定量分析。其他体液和非生物样品可参照使用。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文
件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于
本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GA/T 122 毒物分析名词术语
3 术语和定义
GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。
4 原理
根据乙醇等6种化合物易挥发的特性，经与平行操作的标准物质比较，采用顶空气相色谱(HS/
GC)
检测，依据两种不同性质色谱柱的保留时间进行定性，以峰面积为依据，内标法或外标法定量。或
采用顶空气相色谱-质谱(HS/GC-MS)
检测，依据保留时间、质谱特征碎片离子进行定性。
5 试剂、仪器和材料
5.1 试剂
5.1.1 水，符合 GB/T 6682 规定的三级。
5.1.2
标准物质：乙醇、甲醇、正丙醇、丙酮、异丙醇、正丁醇、叔丁醇，纯度均不小于99.5%。
5.1.3 10.0 mg/mL
乙醇(甲醇、正丙醇、丙酮、异丙醇、正丁醇)标准物质储备溶液：分别精密称取标准
物质乙醇(甲醇、正丙醇、丙酮、异丙醇、正丁醇)适量，用水配制成10.0 mg/mL
标准物质储备溶液，
0℃~4℃保存，有效期6个月。实验中所用其他浓度的标准溶液均由10.0 mg/mL
标准储备溶液用水 逐级稀释得到。或采用市售标准物质溶液。
5.1.4 5.0 mg/mL 内标物叔丁醇标准物质储备溶液：精密称取500.0 mg
叔丁醇至100 mL 容量瓶 中，用水定容至刻度，0℃~4℃保存，有效期6个月。
GB/T 42430—2023
5.1.5 0.04 mg/mL 内标物叔丁醇工作溶液：精密吸取5.0 mg/mL
内标物叔丁醇标准物质储备溶液
0.8mL 至100 mL 容量瓶中，用水定容至刻度，0℃~4℃保存，有效期3个月。
5.2 仪器和材料
5.2.1 气相色谱仪：配有氢火焰离子化检测器(FID)。
5.2.2 气相色谱-质谱仪：配有电子轰击(EI) 源。
5.2.3 电子天平：分度值(d) 小于或等于0.1 mg。
5.2.4 顶空自动进样器。
5.2.5 移液器：1.0 mL 和0.1 mL。
5.2.6 顶空进样瓶：10 mL。
5.2.7 硅橡胶垫。
5.2.8 铝帽。
5.2.9 密封钳。
5.2.10 恒温水浴锅：控温精度±2.0 ℃。
5.2.11 注射器：1 mL。
6 分析步骤
6.1 定性分析
6.1.1 检材样品制备
取检材样品血液或尿液100 μL 及0.04 mg/mL 内标物叔丁醇工作溶液500 μL
(采用外标法时，以
水代替内标物叔丁醇工作溶液)置于顶空进样瓶内，盖上硅橡胶垫，用密封钳加封铝帽，混匀，置于顶空
自动进样器样品架上进样，或置于65℃恒温水浴中加热10 min, 用 1 mL
注射器吸取瓶内液面上气体 0.4 mL,进样。
6.1.2 质控样品制备
取质量浓度为0.10 mg/mL
待测目标物标准溶液100μL,作为添加样品，与检材样品平行操作。
取水100μL,作为空白样品，与检材样品平行操作。
6.1.3 仪器条件
6.1.3.1 气相色谱仪参考条件
用气相色谱法定性时应选用两根不同性质的色谱柱进行分析。
以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整。
a) 色谱柱型号可选择但不限于以下四种：
-
BAC1(30 m×0.32 mm×1.8μm)柱或等效色谱柱；
-
BAC2(30 m×0.32 mm×1.2μm)柱或等效色谱柱；
-
ALC1(30 m×0.32 mm×1.8μm)柱或等效色谱柱；
-
ALC2(30 m×0.32 mm×1.2μm)柱或等效色谱柱。
b) 柱温：恒温40℃。
c) 进样口温度：150℃。
GB/T 42430—2023
d) 检测器温度：300℃。
e) 载气：氮气。
f) 柱流量：4 mL/min。
6.1.3.2 气相色谱-质谱仪参考条件
以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：
a) 色谱柱：聚乙二醇固定相(30 m×0.32 mm×0.25μm)色谱柱或等效色谱柱；
b) 柱温：42℃保持3 min, 以25℃/min 升温至120℃保持4 min;
c) 载气：氦气；
d) 流速：1.25 mL/min;
e) 进样量：0.4 mL;
f) 分流比：10:1;
g) 进样口温度：160℃;
h) EI 源电压：70 eV;
i) 溶剂延迟：1.50 min;
j) 离子源温度：230℃;
k) 四极杆温度：150℃;
- 接口温度：180℃;
m) 采集方式：全扫描(SCAN);
n) 乙醇等6种化合物及内标物的保留时间与特征碎片离子见表1。
表 1 乙醇等6种化合物及内标物的保留时间和特征碎片离子
|
|
|
|---|---|---|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
||
6.1.3.3 顶空自动进样器参考条件
顶空自动进样器参考条件：
a) 加热箱温度：65℃;
b) 定量环温度：105℃;
c) 传输线温度：110℃;
d) 气相循环时间：7.5 min;
GB/T 42430—2023
e) 样品瓶加热平衡时间：10.0 min;
f) 样品瓶加压时间：0.10 min;
g) 定量环平衡时间：0.05 min;
h) 进样时间：1.00 min。
6.1.4 进样
分别取空白样品、添加样品和检材样品按6.1.3条件进行检测。进样顺序应确保结果有效。
6.2 定量分析
6.2.1 样品制备
取检材样品血液或尿液100 μL 各两份，按6.1.1操作。
采用单点校正法定量，取与检材样品等量的目标物标准溶液各两份，与检材样品平行操作，得到添
加样品，检材样品中目标物浓度应在添加样品中目标物浓度的(100±30)%内。
采用校准曲线法定量，配制系列浓度目标物标准溶液，每个浓度取与检材样品等量的目标物标准溶
液各两份，得到系列浓度的添加样品，与检材样品平行操作。检材样品中目标物浓度应在校准曲线的线
性范围内，相关系数(r) 不小于0.997。
6.2.2 仪器参考条件
气相色谱仪参考条件见6.1.3.1,顶空自动进样器参考条件见6.1.3.3。
6.2.3 进样
分别取检材样品、系列浓度的添加样品或单点浓度的添加样品，按6.2.2条件进样分析。
6.2.4 结果计算
6.2.4.1 含量计算
6.2.4.1.1 内标-校准曲线法
记录检材样品和添加样品中目标物和内标物的峰面积值，以添加样品中目标物与内标物的峰面积
比为纵坐标、添加样品中目标物的质量浓度为横坐标进行线性回归，得到线性方程。根据检材样品中目
标物及内标物的峰面积比，按公式(1)计算出检材样品中目标物的质量浓度。
(1)
式中：
——检材样品中目标物的质量浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL);
Y— 检材样品中目标物与内标物叔丁醇的峰面积比；
a — 线性方程的截距；
b — 线性方程的斜率。
6.2.4.1.2 内标-单点校正法
记录检材样品和添加样品中目标物和内标物的峰面积值，根据检材样品和添加样品中目标物及内
标物的峰面积，按公式(2)计算出检材样品中目标物的质量浓度。
GB/T 42430—2023
式中：
w —
A
A′—
A;—
A,—
检材样品中目标物的质量浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL);
检材样品中目标物的峰面积；
添加样品中目标物的峰面积；
检材样品中内标物的峰面积；
添加样品中内标物的峰面积；
… ………………
(
添加样品中目标物的质量浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL)。
6.2.4.1.3 外标-校准曲线法
记录检材样品和添加样品中目标物的峰面积值，以添加样品中目标物峰面积为纵坐标、添加样品中
目标物的质量浓度为横坐标进行线性回归，得到线性方程。根据检材样品中目标物的峰面积，按
公式(3)计算出检材样品中目标物的质量浓度。
…………………… (3)
式中：
w— 检材样品中目标物的质量浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL);
Y— 检材样品中目标物的峰面积；
a — 线性方程的截距；
b — 线性方程的斜率。
6.2.4.1.4 外标-单点校正法
记录检材样品和添加样品中目标物的峰面积值，根据检材样品和添加样品中目标物的峰面积，按公
式(4)计算出检材样品中目标物的质量浓度。
…………………… (4)
式中：
——检材样品中目标物的质量浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL);
A — 检材样品中目标物的峰面积；
w'— 添加样品中目标物的质量浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL);
A′— 添加样品中目标物的峰面积。
6.2.4.2 相对相差计算
记录两份平行操作的检材样品含量，按公式(5)计算相对相差。
(5)
式中：
RD — 相对相差；
i 、w2 两份检材样品平行定量测定的质量浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL)。
两份检材样品平行定量测定的质量浓度的平均值，单位为毫克每毫升(mg/mL)。
GB/T 42430—2023
7 结果评价
7.1 定性分析结果评价
7.1.1 顶空气相色谱法定性结果评价
阳性结果评价：在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与添加样品一
致(相对误差在±1%之内),空白样品无干扰，且经选用不同性质的色谱柱进行分析，结果一致，则可判
断检材样品中检出目标物。乙醇等6种化合物及内标物的气相色谱图见附录 A 中图
A.1～ 图 A.4。
阴性结果评价：检材样品未出现与添加样品目标物一致的色谱峰，空白样品无干扰，则可判断检材
样品中未检出目标物。
7.1.2 顶空气相色谱-质谱法定性结果评价
阳性结果评价：在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与添加样品一
致(相对误差在±1%之内),且在扣除背景后的检材样品质谱图中，目标物特征碎片离子(不少于3个)
与添加样品一致，离子丰度比与浓度接近的添加样品相比，相对误差不超过表2规定的范围，空白样品
无干扰，则可判断检材样品中检出目标物。
表 2 离子丰度比的最大允许相对误差范围
|
|
|
|
|
|---|---|---|---|---|
|
|
|
|
|
阴性结果评价：检材样品未出现与添加样品目标物一致的色谱峰，空白样品无干扰，则可判断检材
样品中未检出目标物。
7.2 定量分析结果评价
两份检材样品中目标物含量的相对相差不大于10%(有凝血块的血样不大于15%),定量数据可
靠，其含量按两份检材的平均值计算。检材样品中目标物含量的相对相差大于10%(有凝血块的血样
大于15%),定量数据不可靠，应按6.2重新测定。
乙醇和甲醇中毒参考资料见附录 B 和附录C。
GB/T 42430—2023
延伸阅读
更多内容 可以 GB-T 42430-2023 血液、尿液中乙醇、甲醇、正丙醇、丙酮、异丙醇和正丁醇检验. 进一步学习
