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东船西舫悄无言
3月前
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15 ATAC-seq基础分析
1. ATAC-seq和chip-seq不一样的地方: --no-mixed 不允许一个reads比对上,另一个比对不上。要么一对都比对上,要么都比对不上。 --no-di...
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东船西舫悄无言
3月前
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14. ATAC-seq原理
1. 绝大部分染色质处于浓缩在一起的、封闭的状态,少数的2%、3%的区域处于开放状态。 2. 核小体占据、核小体定位 2.1 DNA缠绕在核小体上,核小体到底位于DNA的什...
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东船西舫悄无言
3月前
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13. 组蛋白修饰需要注意的细节
如果做的是broad peak应该注意的细节 在参数设计的时候要注意: 转录因子,全部是narrow peak; 如果是组蛋白就对着这一表格查阅: broad peak其实...
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东船西舫悄无言
3月前
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12. ChIP-seq质控
1、测序数据量(这里是fastp报告) 整体上来说,测序的数据量一般是没有问题的,数据质量一般是没有问题的,Q30的值非常高,过滤前的数据和过滤后的数据相差不多,没过滤掉多...
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东船西舫悄无言
3月前
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11. 使用Diffbind做差异分析
读取样本信息表 构建DBA对象 diffbind_obj$peaks里面包含了每个样本的详细的peaks信息。 diffbind_obj$binding里面打开是一张表格:...
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东船西舫悄无言
3月前
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10. 差异peaks关联基因的功能富集
1.上一步得到的差异peaks(merge后), be like: 2.peaks注释(merge后的): 提取基因做富集分析,见tutorial book。...
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东船西舫悄无言
3月前
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9. PeakSnake自动化流程跑起来
note: 现在主流的信息流程搭建软件:snakemake, nextflow;snakemake是基于python的,nextflow基于java,有个公司nf-core...
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东船西舫悄无言
4月前
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8. Peaks定量与差异分析
单样本:比如有一个脱落酸处理的样本,想研究ZAT6这个转录因子在脱落酸处理的样本中是一个什么情况,它有哪些结合位点,这些结合位点位于哪些基因的附近。 多样本:有时候样本可能...
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东船西舫悄无言
4月前
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7. 使用UROPA进行peaks注释
peaks注释 1.寻找最近基因 如果是H3K4me3,则应该计算peak中心到TSS的距离。 如果是H3K36me3,则应该计算peak中心到gene center的距离...
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东船西舫悄无言
4月前
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6.1 使用ChIPseeker进行peaks注释
选择UROPA的原因 目前所有主流软件都有一个问题,都当作转录因子结合在promoter区域来解决问题。 算距离的时候,所有软件分成2个步骤,首先看peak离哪个基因最近,...
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东船西舫悄无言
4月前
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6. 使用ChIP-seeker进行peaks注释
前言:在基因组找到了转录因子/组蛋白结合位点之后,最终还是要落脚到功能基因上,组蛋白结合到这有什么用?调控了谁?---这就叫peak的注释,或者叫做转录因子/蛋白结合位点的...
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东船西舫悄无言
4月前
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5.1 Motif分析
1. 研究的意义 如果这个TF没有人研究,你找出了它的motif,这个意义较大; 一般这个TF已经研究过了,你找的motif大概率和数据库一样。 在数据库查询转录因子TF?...
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东船西舫悄无言
4月前
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5. Motif分析
1. motif注释 motif注释一般是对转录因子进行注释,一般不对组蛋白进行motif注释。 序列的特征图: 每个位置有个序列的权重。 两种方法 2. 操作 如果是br...
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东船西舫悄无言
4月前
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4.2 Peaks识别与过滤
1. 对peak进行过滤和筛选 1.1 cutoff analysis:无生物学重复 假如没有生物学重复,一个样本只测了1次,那么就是用qvalue进行筛选。 得到: 根据...
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东船西舫悄无言
4月前
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4.1 用igv查看call出来的peaks
1.在bigwig的基础上,查看peak calling。 2. 导入narrow peak文件,bed可以直接用igv打开 养成每一步都用igv查看一下的习惯。检查下结果...
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东船西舫悄无言
4月前
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2.2 用igv查看bigwig文件
导入bw文件 1.设置track高度 2. 设置范围 其他的,比如:genome.fa, gtf和上面讲的用igv查看bam一样。...
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东船西舫悄无言
4月前
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2.1 用igv查看bam
准备数据 genome.fa gtf bam文件 bam.bai 导入基因组 导入gtf 导入bam,bam必须与bam.bai放在一起...
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东船西舫悄无言
4月前
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4. Peaks识别与过滤
1.Peak检测:估计d值并进行shift 怎样得到两个peak间的距离d,即插入片段是多长? 答:双端:如果有10M的reads数,则求它们reads对的平均长度; 单端...
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东船西舫悄无言
4月前
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3.使用DeepTools画图
1.更改颜色 然后保存为:svg格式。Save SVG image bam转成bigwig文件格式,其实是将分辨率为1bp的bam文件划分窗口。 2.reference-p...
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东船西舫悄无言
4月前
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2 数据过滤质控比对到参考基因组
查看文件夹大小: 脑图 1. 数据准备 参考基因组: genome.fa 将参考基因组的格式改为">chr1",而不是单纯的数字。 gtf注释文件: genes.gtf 提...
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2023-02-21